ПРОГРЕСС В ОСНОВНЫХ ИССЛЕДОВАНИЯХ И КЛИНИЧЕСКОМ ПРИМЕНЕНИИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ПРЕПАРАТА КАНГЛАЙТ ЭМУЛЬСИЯ ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ. (Скачать)

 

Проф. Ли Дапэнг

ЧЖЕЦЯН КАНГЛАЙТ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КО., ЛТД 310018

Введение:

           Канглайт для инъекций является новым типом противоопухолевых препаратов, приготовленным методом экстракции активных противоопухолевых компонентов из сырья семян китайского растения Semen Coicis по современной технологии и сформированным в липидную эмульсию для внутривенных и артериальных инъекций. Сейчас КЛТ активно используется более чем в двух тысячах больниц Китая. Опыт клинического применения наглядно показывает, что КЛТ обладает существенной эффективностью при лечении различных видов опухолей, таких как карциномы лёгких, печени, желудка и молочной железы. В то же время, он существенно поднимает иммунные функции и улучшает качество жизни: в комбинации с лучевой и химио- терапией и вспомогательной терапией КЛТ демонстрирует значительное увеличение терапевтического эффекта и уменьшение его токсического действия и вреда для организма. Применение КЛТ перед операцией может вызывать ликвидацию и некроз опухоли, таким образом увеличивая положительный эффект операции; что касается тяжёлых стадий развития рака, КЛТ способен успешно противостоять кахексии, боли при раке, увеличивать вес тела и улучшать качество жизни пациентов. КЛТ не оказывает вредного действия на функции сердца, печени, почек, гемато-поэтическую систему, другие отрицательные эффекты также не обнаружены. Это доказывает, что КЛТ и безопасен, и эффективен в лечении различных видов рака и может быть признан идеальным противоопухолевым препаратом среди известных и доступных в настоящее время терапевтических средств. В то же время глубокое изучение механизма действия КЛТ было выполнено в больших научно-исследовательских институтах по всей стране. Результаты этих исследований позволяют представить этот механизм следующим образом:

  • КЛТ блокирует митоз опухолевых клеток на границе G2 и М фаз клеточного цикла;
  • КЛТ индуцирует апоптоз опухолевых клеток;
  • КЛТ влияет на экспрессию генов опухолевых клеток, увеличивая экспрессию Fas/Apo-1 гена, который ингибирует рост опухолевых клеток, и ингибируя экспрессию bcl-2 гена, являющегося промотором их роста;
  • КЛТ ингибирует ангиогенез, существенно уменьшая образование новых кровеносных сосудов;
  • КЛТ эффективно противодействует кахексии при раке;
  • КЛТ может преодолевать множественную лекарственную устойчивость опухолевых клеток, индекс преодоления устойчивости для некоторых видов химиотерапии может увеличиваться в 50 раз.

             Исследование механизма действия КЛТ послужило основой многих достижений, которые стали теоретическим фундаментом его клинического применения. Появление КЛТ изменило концепцию клинических методов противоопухолевой терапии и принесло новые идеи и знания в оценке клинического терапевтического эффекта противоопухолевых препаратов.

Ключевые слова: Канглайт для инъекций (КЛТ) Противоопухолевые препараты Клиническое исследование Механизм действия

           В 1976 году профессор Ли Дапэн, автор разработки КЛТ и данной статьи, начал заниматься проведением систематических исследований лекарственных трав, экстракцией и очисткой их активных компонентов, разработкой технологий их производства, контроля качества и фармакологического тестирования. Впоследствии учёные многих медицинских и фармацевтических научно-исследовательских институтов, таких как Шанхайский институт фармацевтической промышленности, сформировали группу по сотрудничеству в дальнейшем исследовании КЛТ, которое включало изучение фармакодинамики, токсикологии, фармакокинетики, механизма действия и клинические исследования.

           В 1995 году препарат получил сертификат Нового лекарственного средства Государственного Фармакопейного Комитета (SDA) и Министерства Общественного Здоровья Китая, а в 1997 году – официальное разрешение на производство и продажу. В настоящее время КЛТ широко используется в больших и средних по размеру больницах нашей страны. По объёму продаж КЛТ был признан первым в списке отечественных противоопухолевых препаратов на внутреннем рынке в течение многих лет. Он также был удостоен Правительством Китая наименования «Ключевой новый препарат государственного масштаба». КЛТ уже успешно применялся для терапии многих видов злокачественных опухолей, таких как карциномы лёгких, печени, желудка, пищевода, кишечника, панкреатической железы, почек, яичников, лимфомы, лейкемии, у более чем 300 тысяч пациентов.

           Далее позвольте привести краткое обобщение данных фундаментальных и клинических исследований противоопухолевого действия КЛТ:

 

  1. Изучение фармакодинамики.

1.1. Цитостатическое воздействие КЛТ на опухолевые клетки in vitro.

           Профессор Ли Дапенг и его коллеги из Шанхайского института фармацевтической промышленности провели систематическое фармакологическое изучение КЛТ. Их исследования показали, что КЛТ обладает сильным цитостатическим действием на клеточные линии многих видов опухолей в тестах in vitro, такие, как лейкозы мышей P388, L1210, человеческой карциномы шейки матки HelaS3, рака кишечника человека M7609 [1]. Индекс гибели клеток IC50 на этих моделях составляет 15,1µл/мл, 28,8µл/мл, 12,5µл/мл и 11,9µл/мл, соответственно. Когда концентрация КЛТ превышает 50 µл/мл, размножение клеток этих линий почти полностью ингибируется. В экспериментах оценки эффективности подавления трансплантируемых мышам опухолей было показано, что КЛТ оказывает сильное ингибирующее действие на клетки карциномы лёгких Льюиса, метастазирующей меланомы В16, саркомы W256 и даёт очевидные результаты и соотношения дозозависимости [2]. У бестимусных мышей c ксенотрансплантантами карциномы печени (QGY), которым вводили 25 мл/кг КЛТ внутривенно 10-кратно, индекс гибели клеток составил 83,3% [3]. В других экспериментах голым мышам с перевитыми опухолями человеческой карциномы лёгких (SPC), карциномы кишечника человека М7609, карциномы молочной железы человека Всар-37 вводили 25 мл/кг КЛТ в/в, уровень ингибирования составил 62,4%, 57,2% и 50,0%, соответственно [4].

  Профессор Ху Бин, директор Консультационного Центра по противоопухолевым препаратам Шанхайского института Материя Медика, исследовал ингибирующий эффект КЛТ in vitro на клетках линий человеческой карциномы яичников 3АО, результаты экспериментов показали, что IC50 КЛТ для клеток 3АО составляет 47 µг/мл, в то время как при введении КЛТ в дозах 25 мг/кг мышам с ксенотрансплантантами 3АО в надпочечниках был достигнут отличный терапевтический эффект [5].

1.2. КЛТ усиливает иммунные функции организма.

        Исследования, проведённые в Шанхайском институте фармацевтической промышленности, показали, что КЛТ, подобно действию лентинана, может существенно стимулировать размножение лимфоцитов селезёнки мышей in vitro, при этом наблюдается линейная зависимость стимуляции пролиферации от концентрации препарата [6]. Подобным же образом КЛТ стимулирует пролиферацию лимфоцитов селезёнки у мышей c лейкемией L1210 in vivo, при этом эффект возрастает с увеличением дозы. В экспериментах по определению действия КЛТ на активность естественных киллеров (NK-клеток) in vivo у мышей c лейкемией L1210, так же, как и в in vitro тестах при активации лентинаном, их активность увеличивалась с различной степени. Активность NK-клеток определяли ?Н-TdR тестом на ингибирование [7]. Экспериментальные результаты показали, что необходимая для активации доза КЛТ составляет 25 мг/кг. Активация интерлейкина-2 (IL-2) у мышей с перевитыми опухолями при введении КЛТ (10 мг/кг) оказалась почти в 2,5 раза выше, чем под действием лентинана. В дозах 6,25 мл/кг и 12,5 мл/кг КЛТ сильно активирует фагоцитоз у макрофагов [9]. В то же время учёные обнаружили, что КЛТ способен стимулировать у макрофагов секрецию интерлейкина-1 (IL-1), контрольные эксперименты показали, что КЛТ действует гораздо сильнее, чем иммуномодулятор Бестатин [10].

         В эксперименте по определению воздействия КЛТ на терапевтический эффект лимфокинактивированных киллеров (Lak-клетки) исследователи обнаружили, что активность Lak-клеток по отношению к опухолевым клеткам дэнди, обработанным КЛТ, была намного выше, чем у не обработанных. Одновременно активность NK-киллеров тоже возрастает [11].

1.3. Синергическое действие КЛТ и уменьшение токсичности при комбинации с химиотерапией.

          Специалисты Шанхайского института фармацевтической промышленности провели ряд экспериментов на животных по изучению синергического действия и токсичности химиопрепаратов при комбинированной с КЛТ химиотерапии. Результаты показали, что при комбинации КЛТ (20 мл/кг) с малыми дозами циклофосфамида (СТХ, 10 мг/кг) индекс гибели клеток солидной опухоли W256 72,4% [12], тогда как для СТХ в монорежиме при той же дозе и способе введения IC50 составляет 38,58%. КЛТ (25 мл/кг) в комбинации с DHAD (2мг/кг) увеличивает индекс гибели с 50% (DHAD) до 67% (DHAD + КЛТ). В то же время подавление костного мозга, уменьшение ЛЕЙКОЦИТОЗ, расстройства функций печени и почек, вызываемых химиопрепаратами, очень заметно восстанавливается под дейстием КЛТ. Эти эксперименты подтверждают, что комбинация КЛТ с химиотерапией может не только увеличивать терапевтический эффект, но и существенно снижатть токсичность. При использовании СТХ в монорежиме лейкоцитоз у мышей снижался до 27х10?/мм?, в то время как при комбинации с КЛТ лейкоцитоз поддерживался на уровне 68х10?/мм?, по сравнению с контрольной группой 64х10?/мм?. КЛТ также способен уменьшать уровень лейкоцитоза, вызванный харрингтонином, у нормальных животных; периферический лейкоцитоз у мышей после обработки харрингтонином, снижался до 44х10?/мм?, а при комбинации с КЛТ его удавалось поддерживать на 81-96х10?/мм? (контрольная группа 88х10?/мм?). В другом эксперименте химиотерапевтические препараты 5-фторурацил(5-Fu), циклофосфамид (CTX), дихлордиаминплатину (DDP) комбинировали с КЛТ, и лейкоцитоз у мышей мог оставаться на уровне нормы, даже при действии высоких доз химиопрепаратов; функции печени (ALT), почек (BUN) также поддерживались на нормальном уровне, по сравнению с химиотерапией в монорежиме была очень большая разница (р<0,01) [14].

 

  1. Изучение механизма противоопухолевого действия КЛТ.
    • Действие КЛТ на клеточный цикл.

        Экспериментальные результаты воздействия КЛТ на клеточный цикл были получены проф. Зенг Шу и др. Янг Хуа. Они подтвердили способность КЛТ тормозить прогрессию клеточного цикла на линии клеток человеческой эритролейкемии К562 в дозозависимом соотношении. При обработке 1 µл/мл в течение 48 часов процент клеток, находящихся в S и G2+M фазах существенно увеличивался, в то время как количество клеток в G1 фазе сокращалось. При увеличении дозы до 5 µл/мл процент клеток в S фазе очевидно уменьшался, а клеток в G2+M фазе возрастал. При увеличении дозы до 10 µл/мл процент клеток в S фазе уменьшался до 11,6% по сравнению с контролем, а количество клеток в G2+M фазе увеличивалось в 11 раз. Когда дозу увеличивали до 50 µл/мл, все клетки погибали и было невозможно анализировать их распределение по фазам клеточного цикла. Приведённые выше результаты показывают, что механизм действия КЛТ заключается в ингибировании прогрессии клеточного цикла на границе G2 и M фаз, уменьшении количества клеток, входящих в G0 и G1 фазы, уменьшении процента клеток в S фазе, количества митозов и, соответственно, ингибировании деления опухолевых клеток, которое приводит к вхождению их в апоптоз [15]. Данное исследование доказывает, что механизм противоопухолевого действия КЛТ заключается в ингибировании митоза и пролиферации опухолевых клеток и, возможно, это основной механизм его цитостатического воздействия на опухолевые клетки.

    • Индукция апоптоза опухолевых клеток под действием КЛТ.

       Считается, что причина развития злокачественных опухолей заключается в неконтролируемом делении раковых клеток и задержкой апоптоза. Изучение механизмов, препятствующих апоптозу, является одним из ведущих направлений в современной онкологии. Препараты, индуцирующие апоптоз опухолевых клеток, открыли новый подход к методам лечения рака. Проф. Зенг Шу и др. Янг Хуа провели экспериментальное исследование обработки клеток линии К562 КЛТ при помощи TUNEL и Annexin V мечения и методов флуоресцентной проточной цитометрии с целью изучения механизма прямого цитотоксического действия КЛТ на опухолевые клетки и его участия в апоптотической терапии рака.

         Данное исследование наглядно показало, что клетки человеческого эритролейкоза К562 после обработки 10 µл/мл эмульсии КЛТ в течение 6 часов входят в апоптоз. При повышении дозы КЛТ наблюдается повреждение клеточной мембраны и усиление окрашивания, PI индекс свидетельствует о некрозе клеток. В отношении солидных опухолей, в клетках карциномы кишечника человека SW1116 при обработке 10 µл/мл КЛТ может быть индуцирован апоптоз (TUNEL-метод). Однако, процент положительных TUNEL-меченных клеток уменьшается с увеличением дозы КЛТ. Было также обнаружено, что после обработки КЛТ ультраструктура опухолевых клеток сильно меняется, наблюдается сильная дегенерация вакуолей, конденсация хроматина, появление гранул апоптоза, эти изменения являются морфологическими характеристиками клеточного апоптоза. В наших экспериментах большинство культур клеток оказались чувствительны к КЛТ за немногими исключениями, одно из которых линия рака кишечника Colo 205.

       Проф. Ши Тинзан с коллегами отделения онкологии больницы Р.R.A. General применяли методы морфологической цитофлуориметрии, ДНК электрофореза и Annexin V- мечения для определения возникновения апоптоза и реверс-полимеразно-цепную реакцию RT-PCR для определения изменения экспрессии генов Fas/Apo-1, bcl-2, c-myc и других связанных в апоптозом генов. Экспериментальные результаты показали: индуцируемый КЛТ апоптоз не наблюдался на линии человеческой аденокарциномы лёгких LA549, но был очевиден на линии острого лимфогранулоцитарного лейкоза HL60. В процессе апоптоза клеток HL60 уровень транскрипции апоптотического гена Fas был выше, чем до обработки препаратом. Экспрессия гена c-myc не сильно изменилась.

        Проф. Шень Венджиан, I-ая больница медицинского университета Пекина, Центр терапии опухолей, использовал мечение терминальной диоксинуклеотидил- трансферазой в иммуно-флуоресцентном анализе (TUNEL-метод) для определения апоптоза в клетках рака почек. Результаты были следующие: IC50 КЛТ ингибирования клеток рака почек 19,31 µл/мл. КЛТ в дозах 5 µл/мл и 10 µл/мл был эффективен в индукции апоптоза, процент апоптотических клеток карциномы почек составил 31,30% в контроле и 89,76% в группе, обработанной КЛТ, соответственно. С увеличением концентрации КЛТ число апоптотических клеток резко сокращалось. В дозах 15 µл/мл и 20 µл/мл КЛТ процент апоптотических клеток был менее 10% [10]. В заключении, существует тесная зависимость между концентрациями КЛТ и индукцией апоптоза или некроза. Поэтому апоптоз и некроз опухолевых клеток, индуцируемые КЛТ, являются механизмами его противоопухолевого действия.

    • Действие КЛТ на экспрессию онкогенов.

        Проф. Шень Венджиан, I-ая больница медицинского университета Пекина, Центр терапии опухолей, использовал метод МТТ-теста для определения цитостатического эффекта КЛТ на клетки карциномы почек, а также иммуно-гистохимическое окрашивание для анализа действия КЛТ на экспрессию генов р53 (ингибирующий онкоген), bcl-2 (прото-онкоген). Результаты: индекс ингибирования экспрессии (LI) р53 в группе КЛТ был 16,8%, в то время как в контроле его экспрессия не наблюдалась; LI экспрессии bcl-2 в контрольной группе был 25%, а при обработке 10 µл/мл КЛТ – 6,6%. Результаты показывают, что индуцируемый КЛТ аопоптоз опухолевых клеток может находиться под положительной регуляцией экспрессии р53 и отрицательной регуляцией экспрессии bcl-2 генов.

        Проф. Ю Хай, университет Зейджианг, институт рака, провёл исследование влияния КЛТ на экспрессию Fas гена на поверхности клеток линии Colo 205, которая оценивалась RT-PCR методом. Клетки предварительно обрабатывали КЛТ в течение 4 часов и затем инкубировали 24 часа, экспрессия Fas гена была очевидной. В контроле PCR-продукт этого гена (0,46 kb) не наблюдался. Для оценки экспрессии Fas гена на поверхности клеток линии Colo 205 до и после предварительной обработки КЛТ использовался метод иммуно-флуоресцентной цитометрии (FCM). Уровень экспрессии Fas гена на поверхности Colo 205 до предварительной обработки КЛТ был 21,1%±3,4%, после обработки он увеличился до 60,4%±7,8%. На основе характеристик Fas гена, который активируется своим мембранным рецептором-антителом, мы наблюдали эффект гибели клеток Colo 205 под действием анти-Fas антител при помощи МТТ-метода. Результаты показали, что клетки Colo 205 больше повреждаются анти-Fas антителами после предварительной обработки КЛТ, это свидетельствует о положительной регуляции КЛТ экспрессии Fas/Apo-1 [19]. КЛТ, таким образом, вызывает апоптоз и гибель опухолевых клеток.

       Проф. Янг Юфей, больница Хай Юань Академии традиционной китайской медицины, в процессе исследований анти-кахексии на генных чипах сделал окрытие, что КЛТ может положительно регулировать экспрессию фактора транскрипции YY1, а значит, он способен ингибировать репарацию ДНК, синтез АДФ и влиять на экспрессию прото-онкогена c-myc.

       Вышеуказанные эксперименты также позволяют предположить, что КЛТ отрицательно регулирует экспрессию bcl-2, промотора пролиферации опухолевых клеток, и одновременно положительно регулирует экспрессию р53, ингибитора роста клеток рака. Этот результат заслуживает дальнейшего изучения.

    • Действие КЛТ на ангиогенез.

        Ангиогенез служит основой быстрого роста и метастазирования злокачественных опухолей. Ингибирование образования новых кровеносных сосудов стало одним из основных направлений в онкологических исследованиях. Занг Лиан с коллегами, факультет Медицины университета Куиндао провели исследование под названием: «Влияние КЛТ на ангиогенез» [15]. В этой работе использовалась бессывороточная культуральная среда (DMEM/HAMF12, 1:1), в которой культивировали клетки дуги аорты в трёхмерном геле в течение 28 дней. Опыт разделили на три группы: контрольная, обрабатываемая 0,1 мг/мл витамина Е, обрабатываемая 10 µл/мл КЛТ; каждая группа включала по 8 дуг аорты, состояние ангиогенеза наблюдали в инвертированный микроскоп. Результаты показали, что КЛТ существенно ингибирует образование новых кровеносных сосудов, увеличивает скорость деградации сосудов, входящих в фазу регрессии. Ингибирующий эффект КЛТ был намного выше, чем у витамина Е [20]. Результаты указывают, что ингибирование ангиогенеза является одним из механизмов противоопухолевого действия КЛТ.

       Проф. Вей Пинькан, больница Лонг Марш II-го Шанхайского военно-медицинского университета, наблюдал влияние КЛТ на ангиогенез, используя модель мембраны аллантойса куриного эмбриона. Он обнаружил свойство КЛТ ингибировать деление эндотелиальных клеток кровеносных сосудов, процесс, который индуцируется опухолевыми клетками, подавлять миграцию эндотелиальных клеток сосудов и образование новых сосудов в мембране аллантойса куриного эмбриона.

    • Анти-кахексическое действие КЛТ.

          Кахексия при раке – одно из основных осложнений у пациентов в тяжёлых стадиях развития заболевания. Её главные симптомы – это потеря аппетита, предельное истощение, анемия, слабость и прикованность к постели. Приблизительно 50% онкологических больных в последних стадиях рака погибают от кахексии. Поэтому так важно исследовать её механизм, разработать эффективные методы борьбы, чтобы улучшить качество жизни пациентов. Сейчас международный уровень знаний о появлении и развитии кахексии определяет её причину, как ненормальный уровень содержания в сыворотке крови цитокинов, таких как TNF-a, IL-1 и IL-6.

         Проф. Ли Тонгду, знаменитый китайский терапевт по обезболиванию и реабилитации рака онкологической больницы провинции Анхай, и проф. Лью Айгуо, его аспирант, с коллегами провели экспериментальное исследование противо-кахексического действия КЛТ при раке. В своей работе они сделали модель кахексии, перевивая мышам Т 739 опухоли LA795 (мышиная аденокарцинома лёгких) и наблюдали изменение веса тела, снижение приёма пищи, развитие опухолей. У кахексических мышей в группе, получавшей КЛТ, и контрольной группе в сыворотке крови был измерен уровень цитокинов, имеющих отношение к развитию кахексии. Результаты эксперимента подтвердили, что начинная с 14-го дня после прививки опухолевых клеток (в это время больные мыши входят в фазу а кахексии, выражающуюся в уменьшении потребления пищи, воды, снижении веса тела и т.д.). Мышам постоянно давали лекарство в течение 1 недели, потребление пищи и вес тела явно восстановились, и по этим показателям не было существенной разницы со здоровыми животными. Однако по сравнению с группой кахексических мышей, не получавших лечение КЛТ, наблюдалась большая разница (р<0,01). Патологическое обследование также показало, что после лечения животных КЛТ рост опухолей в основном прекратился. Более того, у части мышей появилось разжижение и некроз опухолей, а продолжительность их жизни увеличилась. Лабораторные исследования содержания цитокинов, ассоциированных с кахексией, принесли неожиданный результат: уровень интерлейкина-6 в сыворотке крови пролеченных КЛТ мышей не только не сократился, но, наоборот, сильно вырос и более чем в два раза превысил таковой у контрольной группы [14]. Этот феномен совершенно опровергает точку зрения учёных мира о том, что вслед за лечением кахексии, уровень IL-6 в сыворотке крови должен уменьшаться одновременно с уровнями TNF-a и IL-1. В чём причина данного феномена? Какую роль играет IL-6 в процессе развития кахексии при раке? И какая взаимосвязь между лечение КЛТ и повышением уровня IL-6 в сыворотке крови? Проф. Лью Айгуо с коллегами в больнице Ксинхуа провинции Анхай обнаружили, что КЛТ может сильно снижать уровень сывороточных TNF-a, IL-1 и IL-6.

    • Преодоление множественной лекарственной устойчивости под действием КЛТ.

        Множественная лекарственная устойчивость (МЛУ) – одна из важных причин конечного отсутствия терапевтического эффекта химиотерапии рака. Согласно точке зрения большинства учёных-фундаменталистов, появление МЛУ связано с повышением экспрессии Р-гликопротеина на поверхности опухолевых клеток. Функция Р-гликопротеина заключается в выбрасывании препарата, попавшего внутрь опухолевой клетки, наружу, таким образом накопление лекарства в клетках уменьшается, и это приводит к проявлению феномена МЛУ. Вещества, преодолевающие МЛУ, ингибируют действие Р-гликопротеина и восстанавливаю чувствительность опухолевых клеток к химиотерапии.

         Верапамил (VER) в комбинации с химиотерапией ревертирует МЛУ опухолевых клеток. Однако, его токсичность ограничивает его интенсивное использование в клинической практике. Большое количество экспериментов по клинической фармакологии подтвердило, что КЛТ в комбинации с химиотерапевтическими средствами обладает хорошим синергическим действием в борьбе с клетками опухолей и очевидно повышает терапевтический эффект при снижении токсичности и побочных эффектов химиопрепаратов. С целью рассмотрения механизма такого действия КЛТ проф. Зенг Шу и др. Янг Хуа онкологического института Зейджианского медицинского университета выполнили исследовательскую работу «Влияние КЛТ на МЛУ опухолевых клеток». Результаты их исследования продемонстрировали, что устойчивая линия человеческого эритролейкоза К562/vcr – типичная МЛУ-линия с очень сильной устойчивостью к различным химиотерапевтическим агентам, включая растительные препараты (винкристин, харрингтонин), препараты антраценового ряда (доксорубицин, этопозид), антибиотики (митомицин). Она слегка резистентна и к КЛТ: IC50 для КЛТ на исходных клетках К562 был 38,5 µл/мл, а на устойчивой линии К562/vcr – 136,4 µл/мл. Результаты также показали, что IC50 для доксорубицина (DOX) на К562 составляет 0,9 µл/мл, а на К562/vcr – 30 µл/мл, что в 33 раза выше, чем для чувствительной линии. Если КЛТ использовался в комбинации с DOX в концентрации КЛТ 2 µл/мл, IC50 для DOX на К562/vcr составила всего лишь 0,705 µл/мл; если концентрацию КЛТ повышали до 4 µл/мл, IC50 для DOX на К562/vcr снижалась до 0,664 µл/мл; если концентрацию КЛТ повышали до 8 µл/мл, IC50 для DOX на К562/vcr составляла только 0,555 µл/мл. Эти результаты дают основание думать, что для достижения одинакового терапевтического эффекта при вышеуказанных разных концентрациях КЛТ требуемая доза DOX может быть уменьшена во много раз (индекс изменения резистентности RMI для различных концентраций DOX составил 42,6; 45,2 и 54,1 соответственно). Результаты также показывают, что комбинативная терапия КЛТ с DOX совершенно преодолевает устойчивость линии К562/vcr к доксорубицину. Более того, КЛТ таким же образом преодолевает устойчивость к другим химиотерапевтическим препаратам на иных линиях с МЛУ. Это открытие стало очень полезным в клинической практике для решения проблем химиотерапевтической устойчивости опухолей и уменьшения токсичности химиотерапии.

        Все приведённые выше исследования свидетельствуют, что благодаря задержке клеточного цикла на границе фаз G2/M, ингибированию ангиогенеза сосудов опухолей, влиянию на экспрессию онкогенов, регуляции уровня цитокинов в сыворотке крови, преодолению лекарственной устойчивостицитостатическому и цитотоксическому эффектам, ингибированию роста и метастазирования опухолей КЛТ воздействует на клетки злокачественных опухолей.

 

  1. Клинические исследования КЛТ для инъекций.

С 1995 года широкомасштабные клинические исследования показали, КЛТ не только оказывает цитостатическое воздействие на опухолевые клетки, но также стимулирует иммунитет, проявляет синергическое действие и снижает токсичность при комбинации с химио- и лучевой терапией. Он также облегчает боль, улучшает качество жизни пациентов и увеличивает продолжительность выживания. Он действительно является идеальным противоопухолевым препаратом в Китае и за рубежом.

3.1. Лечение первичной карциномы лёгких при помощи КЛТ.

        Под руководством проф. Пиао Бинкуи в больнице Гуан Эн Мень Академии Традиционной Китайской медицины, Центральной группой лечения первичной бронхо-лёгочной карциномы при помощи КЛТ были проведены объединённые исследования. Их результаты показали: уровень терапевтического эффекта у пациентов, получавших монотерапию КЛТ (полная ремиссия CR + частичная ремиссия PR), составляет 12,15% (26/214 больных); группа контрольной химиотерапии (CR+PR) – 14,29% (13/91); существенной разницы между этими двумя группами не наблюдалось.

        В этой работе мы также обнаружили следующие находки: такие симптомы болезни, как кашель, кровохарканье, боль в груди, лихорадка, слабость и анорексия у пациентов с первичной бронхо-лёгочной карциномой улучшились после лечения КЛТ. Также было обнаружено, что КЛТ проявляет определённые иммуностимулирующие свойства: увеличивает активность NK-клеток и уровень IL-2 в крови, улучшает соотношение подгруппы Т-лимфоцитов в лимфоцитарной формуле и «восстанавливает» картину периферической крови. Что касается наблюдения антагонистических реакций, они проявлялись в отношении печени, почек и работы сердца.

3.2. Немелкоклеточная карцинома лёгких (NSCLC) при комбинативном лечении КЛТ и химиотерапией.

       Комбинативное лечение КЛТ с химиотерапией (PVM-схема) проводилось под руководством проф. Чу Датон, в онкологической больнице Китайской Академии Медицинских Наук. Результаты клинических наблюдений перечислены ниже: уровень терапевтического эффекта у пациентов, получавших PVM + КЛТ составляет 45% (18/40); группа контрольной химиотерапии – 22% (7/32); наблюдалась существенная разница между этими двумя группами [2]. Этот результат подтверждает синергизм действия КЛТ в комбинации с химиотерапией, который сильно увеличивает терапевтический эффект химиопрепаратов в лечении немелкоклеточной карциномы лёгких. Из различных лабораторных исследований стало понятно, что КЛТ улучшает общее состояние пациентов, восстанавливает и повышает количество тромбоцитов в крови.

3.3. Первичная карцинома печени при лечении КЛТ.

        Клиническое наблюдение терапевтического эффекта КЛТ при лечении первичной карциномы печени было выполнено под руководством проф. Ли Пейвень, Пекинская больница Японско-китайской дружбы. Результаты лечения показывают: уровень терапевтического эффекта КЛТ в монорежиме при лечении карциномы печени составляет 11,42%; а в группе химиотерапии (PAF-режим) – 9,8%; существенной разницы между этими двумя группами не наблюдалось. КЛТ существенно улучшает симптомы заболевания. Общий уровень его эффективности 89,95%. Кроме всего прочего он может улучшать качество жизни пациентов и усиливать иммунные функции. Также было показано, что КЛТ не ингибирует костный мозг, не нарушает функции печени и почек, побочные эффекты, такие как тошнота, лихорадка, были умеренными и спонтанно исчезали [3].

3.4. Первичная карцинома печени и первичная карцинома лёгких при комбинативном лечении КЛТ + интервенционная химиотерапия (КЛТ+IT).

       Химиотерапия через канюляцию артерий стала быстро развивающимся в последние годы методом лечения злокачественных заболеваний, однако часто пациенты не выдерживают введение больших доз химиопрепаратов из-за их высокой токсичности и побочных эффектов, и поэтому упускается время, что ведёт к снижению терапевтического эффекта. Интервенционная химиотерапия (IT) – один из новых и наиболее важных методов лечения карцином печени и лёгких на сегодняшний день. Под предводительством больницы Традиционной медицины провинции Зейджиан и при участии Общественной больницы провинции Зейджиан, больницы Медицинского университета Наньджин и т.д. группой сотрудничества была выполнена работа: «III-я фаза клинических испытаний комбинированной терапии КЛТ и интервенционной терапии в лечении первичной карциномы печени и первичной карциномы лёгких». Выборочные контролируемые клинические наблюдения включают 198 случаев первичной карциномы печени, уровень терапевтического эффекта у пациентов, получавших КЛТ+IT (CR+ PR), достигал 69,23% (90/130); уровень эффективности IT без КЛТ – 38,23% (26/68); терапевтические результаты комбинированной с КЛТ интервенционной терапии существенно выше. Улучшения в группе КЛТ+IT выражались также в симптомах по шкале Карновского, восстановлении веса тела и функций иммунитета, периферического лейкоцитоза, которые были намного лучше, чем в группе IT-терапии [26].

3.5. Комбинация КЛТ с лучевой терапией злокачественных опухолей.

       Комбинация КЛТ с лучевой терапией была изучена проф. Шен Веуджиан с коллегами в больнице Пекинского Медицинского университета. Они использовали этот метод для лечения карцином лёгких, влагалища, пищевода и т.д. 190 пациентов были разделены на две группы: комбинация КЛТ с лучевой терапией (104 случая) и монорадиотерапия (86 случаев). В первой группе КЛТ вводили внутривенной инфузией по 100 мл/сутки, всего было введено 2000 мл суспензии. В группе лучевой терапии применялась рутинная схема лечения: 200cGy единовременно, один раз в сутки, 5 раз в неделю, общая доза 6000cGy. Результаты лечения: уровень терапевтической эффективности комбинированной с КЛТ лучевой терапии (CR+PR) достигал 82,2% (83/101); контрольная группа (CR+PR) 60,4% (52/86), имется заметная разница между двумя группами. При комбинации КЛТ с лучевой терапией фактор эффективности 1,36 (82,2%/60,4%) [27].

3.6. Комбинация КЛТ с хирургическим лечением злокачественных опухолей.

       Проф. Фу Ю, Пекинский госпиталь болезней грудной клетки, проф. Зан Нуган, онкологическая больница Китайской Академии Медицинских Наук, проф. Ху Гуанвей, онкологическая больница Пекина, провели совместное исследование больных до и после лечения. КЛТ вводили по 200 мл внутривенной инфузией, 1 раз в сутки, 10 дней, затем на 3-7 день лечения больных оперировали. По результатам осмотра после операции стало ясно, что у больных, получавших терапию КЛТ, появилась большая зона некротизированной опухолевой ткани, из них те, у кого некроз опухолевой ткани достиг 25%, составили 62,22% (28/45) от общего числа больных. В контрольной группе пациентов, не получавших КЛТ, эта величина была 26,67% (8/30); таким образом, разница терапевтической эффективности между двумя группами очевидна. Пациенты, у которых некроз опухолевой ткани достиг 50%, в КЛТ-группе составили 28,9% (13/45), а в контрольной группе – 13,3% (4/30), разница между группами также значительная [28].

3.7. Обезболивающий эффект КЛТ и улучшение качества жизни пациентов.

       Проф. Ли Тонгду с коллегами при участии больницы Пекина, онкологической больницы Китайского медицинского университета, онкологической больницы провинции Шаньдон, онкологической больницы провинции Зейджиан провели III-ю фазу клинических испытаний КЛТ и оценили его действие на контроль боли иулучшение качества жизни пациентов с тяжёлыми стадиями развития рака. 376 пациентов в тяжёлых стадиях дали добровольное согласие на лечение КЛТ, из них в 328 случаях жаловались на боль пациенты с карциномами лёгких, печени, молочной железы, пищеварительного тракта и т.д. Результаты: уровень ослабления боли был 80,49% (из них PR 56,1%, CR 24,39%). Для боли разной степени выраженности (умеренная, средняя, сильная) уровень ослабления умеренной боли был 100% (62/62), уровень ослабления средней боли 86,18% (131/152), сильной боли 62,28% (71/114). Было обнаружено, что боль постепенно уменьшается с 1-3 дня введения лекарства. Среди этих больных 96 использовали анальгетики морфинового типа, в 31 случае доза морфина была снижена в курсе терапии и в конце совсем отменена. Отмена стала возможной в 32,29% случаев (31/96). Ослабление боли сохранялось в течение 1-7 дней после прекращения введения препарата. Среди пациентов, получавших терапию КЛТ, 92,02% (346/376) имели более высокие показатели по шкале Карновского, из них те, чьи показатели выросли более чем на 20%, насчитывали 76,60% (288/376), оценка уровня качества жизни составила 91,22% (343/376). В то же время исследование показало, что из пациентов, получавших терапию КЛТ, вес тела увеличился у 42,29% (159/376) и вес тела стабилизировался у 52,13% (196/376) [29].

 

В 2000 году применение КЛТ как Нового лекарственного средства для исследований (IND) было рассмотрено Ассоциацией по Пищевым и Лекарственным Веществам (FDA) Соединённых Штатов. После строгой экспертной оценки согласно требованиям FDA и анализа 15 специалистами применение было разрешено и препарат получил одобрение за высокое качество. Основные критерии качества КЛТ не только удовлетворяли всем требованиям, предъявляемым к инъекционным препаратам Фармакопейным Комитетом США (качество распределения по размерам гранулярных частиц эмульсии оказалось выше, чем у двух препаратов, производимых в США), но характерный спектр содержания компонентов лекарственного вещества достигал уровня контроля для западных препаратов.

В марте 2001 года КЛТ получил разрешение FDA США на проведение I-й фазы клинических испытаний в известном центре онкологических научных исследований Хантцмана. Недавно 1-я, 2-я и 3-я группы пациентов с разной дозировкой введения КЛТ (100 мл, 200 мл и 300 мл, соответственно) успешно завершили лечение, а в конце декабря 2001 года 4-я и 5-я группы дозировок начали терапию и эти испытания должны закончиться в конце марта 2002 года.

Все пациенты, получавшие лечение в ходе испытаний – больные в тяжелых стадиях рака; все они вынуждены были бросить или отказались от химиотерапии. В течение проведения лечения в первых трёх группах не было ни одного случая проявления токсичности или побочных эффектов КЛТ, отличный терапевтический эффект был достигнут у всех пациентов. Директор Онкологического Научно-исследовательского Центра Хантцмана и руководитель I-й фазы клинических испытаний написал следующий предварительный комментарий для FDA: «В первой фазе клинических испытаний КЛТ показаны его активная роль в улучшении качества жизни и увеличении её продолжительности у онкологических больных».

         В заключении, на большом количестве клинических исследдваний было доказано, что КЛТ обладает отличным терапевтическим эффектом на различных видах злокачественных опухолей, включая рак лёгких, печени, карцинома желудка, рак молочной железы, и т.д. и существенно стимулирует иммунные функции, улучшает качество жизни пациентов; комбинация КЛТ с лучевой и химиотерапией или с интервенционной терапией сильно увеличивает клиническую эффективность лучевой и химиотерапии, уменьшает её токсичность и побочные эффекты; послеоперационное применение КЛТ может очевидно увеличивать чувствительность к лучевой и химиотерапии; КЛТ стимулирует разжижение и некроз опухолевой ткани, что увеличивает успех операций. Мы не обнаружили каких-либо свидетельств вредного воздействия на функции сердца, печени, почек и гематопоэтической системы и других серьёзных побочных реакций, что доказывает его безопасность и эффективность. Поэтому Канглайт можно считать идеальным противоопухолевым препаратом среди современных химиотерапевтических средств.

References

[1] Dept. of Pharmacology, Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry: A compilation of the pharmacodynamic study of KLT Injection (1988-1992).
[2] Li Bingsheng et al. Proceedings of the 7th Academic Meeting of Chinese Pharmacological Society. Division of Pharmaceutical Industrial pharmacology, 1996, 52.
[3] Li Bingsheng et al. etah proceedings of the 7th Academic Meeting of Chinese pharmacological Society. Division of pharmacutical Industrial pharmacology, 1995, 52.
[4] Shanghai Institute of Pharmacentical Industry: A compilation of the pharmacodynamic study of KLT Injection (1988-1992).
Anti-cancer Drugs Consultative Center, Shanghai Tumors Research Institute: Achievements in pharmacodynamic study of KLT 1998.
[5] -[14] Abbr.
[15] Yang Hua et al. Collection of the Studies of Kanglaite Injection Against Tumors [M] Zhejiang University Press, Zhejiang, 1998, 107-109.
[16] Yang Hua et al. Collection of the Studies of Kanglaite Injection Against Tumors [M]. Zhejiang University Press, Zhejiang, 1998 110-114.
[17-18] Shen Wenjiang et al. studies on the Apoptosis of Renal Cancer Cells Induced by KLT Injection and Its Effect on the Expression of P53 and bcl-2, Chinese Journal of Clinical Oncology 1999, 26(6); 439-442.
[19] Jin Hongchuan et al. Study on Biological sensitivity Enhancing Effect of Kanglaite Injection in Human Colon Carcinoma Cells, Journal of Practical Oncology 1999, 14(5): 308-310.
[20] Zhang Liang et al. Effect of Kanglaite Injection on Angiogenesis, Journal of Oncology 2000, 20(4): 313-314.
[21] Li Tongdu et al. Experimental Study of the Counteractive Effect of Kanglaite Injection on Cancerous Cachexia, Chinese Journal of Clinical Oncology 1998, 25(2): 131
[22] Zheng Shu et al. Collection of the Studies of Kanglaite Injection Against Tumors [M], Zhejiang University Press, Zhejiang 1998 115-118.
[23] Piao Bingkui et al. Collection of the Studies of Kanglaite Injection Against Tumor. [M],Zhejiang University Press, Zhejiang 1998, 152-168.
[24] Chu Datong et al. Collection of the Studies of Kanglaite Injection Against Tumors [M],Zhejiang University Press Zhejiang 1998, 192-197.
[25] Li Peiwen et al. Clinical Study of Kanglaite Injection in Treating Primary Hepatic Carcinoma. Chinese Journal of Clinical Oncology, 1999. 26 (6); 475-476.
[26] Qian Mingshan et al. Collection of the Studies of Kanglaite Injection Against Tumor
[M] Zhejiang University Press, Zhejiang 1998, 214-229.
[27] Shen Wenjiang et al. Collection of the Studies of Kanglaite Injection Against Tumor [M]  Zhejiang University Press, Zhejiang 1998 198-203.
[28] Li Shiye et al. Clinical and Pathological Observations of Kanglaite Injection in the
Treatment of Primary Pulmonary Carcinoma. Journal of Tuberculosis and Thoracic Tumors (1998) 3:19-21.
[29] Li Tongdu et al. Collection of the Studies of Kanglaite Injection Against Tumors [M]
Zhejiang University Press, Zhejiang 1998 184-191.