Исследование фармакокинетики и биодоступности Масла семян Коикс(Скачать)

Ма Юаньмин1, Шень Канкэ2
1.Фармацевтический колледж Шанхайского медицинского университета
2 .Колледж традиционной китайской медицины, Чжецзян

Введение

          Семена Коикс – высушенные семена, полученные при удалении твердой шелухи с плодов Коикс (>coix Lachryma-jobi L Var. Mayuen Stapf.). Они принадлежат к семейству сложноцветных и используются в традиционной медицине тысячи лет. За многие годы было замечено, что семена коикс значительно ингибируют эффекты асцитной карциномы и HCA солидной карциномы. Более того, было фармакодинамически доказано, что эффективное противоопухолевое масло семян коикс, экстрагированное из семян коикс путем долгих технологических исследований, обладает широким спектром действия в ингибировании и уничтожении раковых клеток, уничтожая патогенетические факторы. Препарат для внутривенного применения, полученный из него, используется в клинике и дает хорошие лечебные эффекты при раке легкого, печени и т.д. Для дальнейшего исследования механизмов действия препарата масла семян коикс и его фармакокинетики, оно было помечено в соответствии со структурными характеристиками тритием. Определяли биодоступность и фармакокинетику различных препаратов, применяемых in vivo. Были определены всасывание, распределение, выведение и метаболизм масла семян коикс.

Резюме

             Фармакодинамику, всасывание, распределение, выведение и метаболизм масля семян коикс, меченого тритием, изучали у крыс. Наблюдали процессы при введении крысы 3Н-масло семян коикс путем желудочной перфузии и внутривенной инъекции в хвостовую вену. Период полувыведения составлял 14,23 ч при внутривенном применении и 15,84 ч при желудочной перфузии. Процент биодоступности при желудочной перфузии по отношению к внутривенному введению составил в AUC > 62 %. 3Н-масло семян коикс, введенное в тело мыши, распределилось по всем органам (главным образом в печени и селезенке). Это обеспечивает некоторую теоретическую основу для клинического применения. 40,6 % препарата выводилось с калом и 59,4 % – с мочой. Общий выход оригинального введенного препарата за 24 ч составил 38,29 %. Связывание с белками плазмы крови 3Н-масла семян коикс – 98,4.
 Ключевые слова: 3Н-масло семян коикс, фармакокинетика, биодоступность, гистологическое распределение.

1.Материалы

1.1. Животные

           Крысы-альбиносы серии SD, весом 180±20 г, одинаковое количество самцов и самок.
           Мыши Kunmimg, весом 20±2 г, одинаковое количество самцов и самок.
           Поставщик: Shanghai Research Inctitute of Pharmaceutical Industry (Шанхайский исследовательский институт фармацевтической индустрии).

1.2. Препараты и вспомогательные вещества

          Масло семян коикс (предоставлено KANGLAITE Pharmaceutical Co., Ltd., Batch No.: 96100, content: 99,75).
           3Н-масло семян коикс (помечено в Nuclear Institute of Chinese Academy of Sience – ядерный институт Китайской академии наук).
         Соевый лецитин (производство Shanghai Pujiang Phospholipid Factory).
         Твин-80 (используется в фармации).
         70% хлорная кислота, эфир (AR), PRO ксилен сцинтиллятор, POPOP сцинциллятор, 30% Н2О2, октанол (AR).

1.3. Инструменты и приборы

            Микровесы, Beckman LS 9800, сцинцилляционная жидкость (Е>48 %), высокоскоростной гомогенизатор, пластины с силикагелем GF, приборы для вскрытия, приборы для радиационной защиты и т.д.

2. Методы

2.1. Приготовление 3Н-масла семян коикс для внутривенного введения

          Смесь из 3Н-масла семян коикс, соевого фосфолипида, глицирина и дистиллированной воды гомогенизировали до состояния эмульсии в высокоскоростном гомогенизаторе. Затем эмульсию взбалтывали, разливали в контейнеры, стерилизовали паром и измеряли ее радиоактивность.

2.2. Приготовление 3Н-масла семян коикс для перорального примерения

          3Н-масла семян коикс разбавляли и хорошо перемешивали с дистиллированной водой и твином-80, а затем измеряли радиоактивность.

2.3. Приготовление биологических образцов

2.3.1. Образцы крови

              Кровь (0,1 мл) забирали у крыс и мышей в трубки для образцов. Добавляли гепарин в качестве антикоагулянта, а затем 70% хлорную кислоту (0,5 мл) и 30% Н2О2 (0,1 мл). Образцы настаивали на водяной бане при 80 ?С в течение 30 минут. Затем добавляли дистиллированную воду для доведения объема до 1 мл и далее брали 0,1 мл образца, встряхивали и помещали в сцинтилляционный флакон для измерения.

2.3.2. Гистологические образцы

          Мышей умерщвляли путем перелома шейных позвонков. Их внутренние органы промывали в физиологическом растворе и промокали бумажным фильтром. 100 мг каждого органа брали в качестве образца. Затем добавляли 70% хлорную кислоту (0,5 мл), 30% Н2О2 (0,1 мл) и 1 каплю октанола. Образцы настаивали на водяной бане при 80 ?С в течение 60 минут, пока они были прохладными. Затем добавляли дистиллированную воду для доведения объема до 1 мл и далее брали 0,1 мл образца, встряхивали, помещали в сцинтилляционный флакон для измерения.

2.3.3. Образцы кала и мочи

         Образцы кала (100 мг) и мочи (0,1 мл) брали в разные периоды. Затем в образцы добавляли 70% хлорную кислоту (0,5 мл), 30% Н2О2 (0,1 мл) и 4 капли октанола. Образцы настаивали на водяной бане при 80 ?С в течение 60 минут. Затем добавляли дистиллированную воду до объема 5 мл и 0,1 мл образца помещали в сцинтилляционный флакон для измерения.

2.3.4. Измерение излучения

          После настаивания образец (0,1 мл) помещали в сцинтилляционный флакон, добавляли 9 мл РРО и измеряли радиоактивность.

3. Результаты

3.1. Сравнение биодоступности 3Н-масла семян коикс для внутривенного применения и его пероральной лекарственной формы.

          12 крыс, самцы и самки, были рандомизированно разделены на 2 группы (по 6 крыс в каждой группе). Животных взвесили, перед экспериментом их в течение 24 ч не кормили. Двум группам крыс вводили эмульсию 3Н-масла семян коикс (0,5 мл, 0,25 г/кг) в хвостовую вену и через желудочную перфузию. Через 1; 10; 30; 60; 120; 240; 480; 720; 1140 минут после применения препарата у крыс брали образцы крови. После того, как образцы крови настаивались, измеряли их радиоактивность для получения AUC значения.
AUC:
0---------Т[n]
AUC=пероральное применение/внутривенное применение
0-Т=3941,83 мг/635 7,8 мг=61,9 %
0---------бесконечность
AUC= пероральное применение/внутривенное применение
0-- 5016.5342 мг/8077.5273 мг=62,1 %

3.2. Концентрация препарата и фармакокинетические параметры внутривенной лекарственной формы 3Н-масла семян коикс при однократном применении.

18 крыс линии SD были точно и рандомизированно разделены на 3 группы. Этим группам животных вводили препараты 3Н-масла семян коикс (0,25 г/кг, 0,125 г/кг и 0,0625 г/кг) в хвостовую вену. После введения у крыс брали образцы крови (0,1 мл) через 0,0167; 0,167; 0,5; 1,2; 4; 8; 12; 24 ч. После подготовки образцов крови измеряли и подсчитывали их фармакокинетические параметры.

Таблица 1. Результат измерения концентрации препарата у крыс после внутривенной инъекции при разных дозах и разном времени

Измеренная величина, мг

Время, ч

0,0167

0,17

0,5

1

2

4

8

12

24

Большая дозировка

1872,3

955,0

404,3

320,6

238,3

192,6

172,1

145,0

109,0

Средняя дозировка

1003,4

594,0

258,6

216,8

188,9

162,9

128,4

104,0

74,9

Малая дозировка

595,5

379,5

157,1

119,8

103,4

80,3

65,7

50,6

38,5

Таблица 2. Фармакокинетические параметры внутривенного применения 3Н-масла семян коикс у крыс

Параметр

Дозировка, г/кг

Большая

Средняя

Малая

А, мкг

1730

879,8

533

?, 1/h

5,1

4,9

4,2

В, мг

263,32

200,4

104,6

?, 1/h

0,04375

0,046

0,049

t?/2, ч

0,135

0,141

0,166

t?/2, ч

15,84

15,80

15,91

К21, 1/h

0,71

0,94

0,727

К10, 1/h

0,31

0,24

0,286

К12, 1/h

4,12

3,75

3,21

AUC, мкг*ч

6357,8

4459,14

2229,2

3.3. Концентрация препарата и фармакокинетические параметры пероральной лекарственной формы 3Н-масла семян коикс при однократном применении

18 крыс линии SD были точно и рандомизированно разделены на 3 группы, которым перорально путем желудочной перфузии ввели 3Н-масло семян коикс (0,25 г/кг, 0,125 г/кг и 0,0625 г/кг). После чего у крыс брали образцы крови через 0,0167; 0,167; 0,5; 1; 2; 4; 8; 12; 24 ч. Когда образцы крови были подготовлены, измеряли и подсчитывали их фармакокинетические параметры.

Таблица 3. Результат измерения концентрации перорального препарата у крыс при разных дозах и разном времени

Измеренная величина, мг

Время, ч

0,0167

0,17

0,5

1

2

4

8

12

24

Большая дозировка

6,4

19,2

32,3

84,6

234,5

373,7

248,6

205,3

151,8

Средняя дозировка

3,3

18,2

27,0

70,6

200,1

282,4

219,9

161,4

114,4

Малая дозировка

1,5

3,1

18,0

64,4

138.3

210,0

151,4

125,7

84,8

Таблица 4. Фармакокинетические параметры применения перорального препарата 3Н-масла семян коикс у крыс

Параметр

Дозировка, г/кг

Большая

Средняя

Малая

А, мкг

33,75

29,62

20,72

?, 1/h

2,29

2,87

3,54

В, мг

421,7

308

235,7

?, 1/h

0,05

0,04

0,04

t?/2, ч

0,30

0,24

0,215

t?/2, ч

14,47

14,88

14,23

t?К/2, ч

1,18

0,94

1,08

К21, 1/h

1,83

2,22

2,9

К10, 1/h

0,06

0,05

0,05

К12, 1/h

0,44

0,64

0,62

AUC, мкг*ч

6372,78

5477,62

3941,83

CL, s

0,00013

0,00008

0,0005

Tpeak, ч

4,96

4,86

4,76

Сmax, мкг

306,46

242,26

178,35

3.4. Гистологическое распределение внутривенного препарата 3Н-масла семян коикс при единичном применении

          54 мыши линии Kunming species были точно и рандомизированно разделены на 9 групп (по 6 мышей в каждой). Мышам в хвостовую вену вводили 3Н-масло семян коикс (0,25 г/кг). В течение 0,0167; 0,167; 0,5; 1; 2; 4; 8; 12; 24 ч убивали по 1 группе мышей. У каждой мыши брали по 100 мг тканей крови, печени, селезенки, почек, легких, желудка, мозга и кишечника. После смешивания ткани были точно измерены и подготовлены, после чего произвели измерение и подсчет радиоактивности.

3.5. Выделение

            5 мышей Kunming species были помещены в 5 метаболических клеток. Мышам в хвостовую вену ввели 3Н-масло семян коикс (0,25 мг/кг). У каждой мыши в разные периоды регулярно собирали образцы мочи (0,1 мл) и кала (100мг). Затем измеряли радиоактивность в периоды 0-4 ч, 4-8 ч, 8-12 ч и 12-24 ч.

Таблица5

Образец

Время

0-4 ч

4-8 ч

8-12 ч

12-24 ч

Всего

Моча, мкг

945?328

497?10

373?83

460?136

2275

Кал, мкг

464?150

339?22

311?193

440?198

1554

*Общее выведение: 2275 мг + 1554 мг = 3829 мкг
Каждой мыши вводили 10 мг
Процентное отношение выведенного количества к общему введенному количеству:
382мг/10мг=38,29 %, включая 59,4 % в моче и 40 % в кале.

Таблица 6

Время, ч

Моча и фекалии

Накопленный %

%

Накопленный %

%

Накопленный %

4

9,45

9,45

4,64

4,64

14,09

8

4,97

14,42

3,39

8,03

22,45

12

3,73

18,15

3,11

11,14

29,29

14

4,60

22,75

4,40

15,54

38,29

*данные в таблице показывают процентное отношение выведенного количества к введенной дозе.

3.6. Степень связывания с белками плазмы

3.6.1 In vitro

        После добавления к образцу крови (1 мл), полученному от нормальной не леченой мыши, 3Н-масла семян коикс (50 мл) и 30% ТСА, смесь центрифугировали, осаждали и измеряли радиоактивность в надосадочной жидкости и в осадке. Среднее значение радиоактивности: надосадочная жидкость – 5515, осадок – 340765. Степень связывания: 340765/340765+5515?100 %=98,4 %.

3.6.2 In vivo

            3Н-масло семян коикс той же партии, что и в 3.6.1, вводили каждой мыши. Через 4 ч забирали кровь и добавляли к ней 30% ТСА. Смесь центрифугировали, осаждали и измеряли радиоактивность в надосадочной жидкости и в осдаке.
         Среднее значение радиоактивности: надосадочная жидкость – 2547, осадок 10523. Степень связывания: 10523/2347+10523?100 %=80,5 %.

4. Обсуждение

4.1. Выбор метода измерения

              Масло семян коикс обладает сильным лечебным эффектом против рака. Для изучения метаболизма и всасывания этого препарата были выбраны радиоактивные изотопы. Избыток трития был добавлен, чтобы отметить все двойные связи у ненасыщенных жирных кислот. Меченый компонент не только имеет свои физические и химические свойства, но также имеет свойства радиоактивного нуклеина, поэтому его движение и расположение в теле может быть отслежено. Так как нуклеин имеет собственные химические и биологические свойства, уместные и общие для атомов и молекул в природе, его химические изменения в теле те же, что и при биологическом процессе. Свойства метода радиоактивного 3Н-мечения следующие: 1) он имеет высокую чувствительность и в 10 раз более чувствителен, чем самые чувствительные аналитические весы. 2) он производит незначительные помехи и интракорпоральные метаболиты имеют только небольшие вредные эффекты, следовательно движение и трансформация лекарственного препарата в очень маленькой дозировке могут быть быстро и точно отслежены. 3) легкость в использовании – чтобы провести измерения не нужно отделить меченый препарат от биологических образцов. 4) можно отличить экзогенное вещество от эндогенного, т.к. некоторые вещества являются также нормальными метаболитами, поэтому 3Н-мечение единственный подходящий метод для подобного измерения. 5) он совместим с состоянием организма. Прежде из-за того, что измерительные методы были не достаточно чувствительны, необходимо было вводить избыточную фармацевтическую дозу, которая часто была токсичной, и в этой ситуации нормальные физиологические функции нарушались, поэтому результат измерения не мог показать метаболизм препарата в нормальном физиологическом состоянии. А из-за того, что радиоактивный изотоп обладает высокой чувствительностью, он может быть использован для изучения метаболизма при терапевтической или даже еще более низкой дозировке препарата. 6). Распределение радиоактивных индикаторов можно наблюдать с помощью радиографии. Причина, из-за которой 3Н был выбран в качестве индикатора в том, что органические химические соединения содержат водород, поэтому если 3Н переставить с водородом, это не повлияет на свойства органического химического соединения. К тому же, 3Н существует в избытке, он недорогой, его легко пометить и энергия его радиоактивного луча низка. Он может распределиться по организму, и его токсичность самая низкая в сравнении с другими изотопами. Поэтому радиоактивный 3Н используется для метки масла семян коикс.

4.2. Исследование фармакокинетики

            При нормальном состоянии после всасывания вещества оно будет распределено током крови в каждую ткань и в каждый орган. Вещество из тканей и его метаболиты должны быть перенесены в органы выделения и в последующем выведены из организма. Поэтому концентрация вещества в крови фактически показывает состояние метаболических процессов всасывания, распределения и выведения. Согласно измерению фармакокинетические модели внутривенного препарата 3Н-масло семян коикс и перорального препарата 3Н-масло семян коикс обе соответствуют Открытой Двухячеечной модели:

К12

Центральная модель Периферическая модель

К21

             С помощью анализа фармакокинетических параметров 3 дозировок внутривенного препарата 3Н-масло семян коикс (большой, средней и малой), было замечено, что нет существенной разницы между параметрами. Период полувсасывания (t/2) составил всего 0,135 ч, а период полувыведения (t?/2) составил 16 ч. Очевидно, внутривенный препарат может быстро всасываться, распределяться и быстро оказывать терапевтический эффект в организме. Препарат медленно выводился из крови и его лечебный эффект продолжался сравнительно долгое время.
             Анализ фармакокинетических параметров 3 дозировок (большой, средней и малой) пероральной лекарственной формы 3Н-масла семян коикс показал, что нет существенной разницы между параметрами, период полувсасывания составил 0,3 ч, а период полувыведения – 14 ч. Очевидно, что препарат, введенный перорально, подвергается сравнительно долгому метаболизму и не легко выводится. В свете характеристик полувыведения препарата и способности к накоплению в результате долгосрочного введения, было решено изначально вводить определенную усиленную дозировку, а позже с определенным интервалом поддерживающие дозировки.
           График «время-эффективность» показывает медленно понижающуюся кривую, которая соотносится с медленной способностью препарата высвобождаться из клеток тканей всех органов.

4.3. Биодоступность

          Два фармацевтических препарата, имеющих идентичные химические свойства, не всегда могут оказывать одинаковое биологическое действие. Когда пероральный препарат 3Н-масло семян коикс находился в стадии развития, было важно сравнить его с инъекционным препаратом, эффективность которого была клинически доказана.
          Согласно значению AUC (площадь под кривой) в графике «время-эффетивность» при внутривенном и пероральном применении при одинаковой дозировке, соотношение биодоступности пероральной формы к внутривенной составило 62 %. В соответствии с клиническими требованиями, пероральный препарат, имеющий преимущество из-за легкости применения и удобный для медицинского персонала, был практичен. Тем не менее значение AUC всего лишь показывает общее всосавшееся количество при единичном введении. Согласно измерению, максимальная концентрация перорального препарата (Cmax) в большой, средней и малой дозировках, была соответственно 306,46 мг, 242,26 мг и 178,36 мг, а максимальное время было соответственно 4,96 ч, 4,86 ч и 4, 76 ч.
          И максимальная концентрация и максимальное время – хорошие показатели для оценки всасывания препарата. Клиническая дозировка и время введения препарата могут определяться этими максимальными значениями в разработке клинического препарата.

4.4. Гистологическое распределение

           Распределение препарата в каждом органе после внутривенного введения мыши в разное время показывает, что этот препарат обладает высоким сродством к тканям и имеет долгий период персистенции. Через 10 минут после введения радиоактивность в печени, селезенке и т.д. была гораздо выше, чем в крови и замедлялась при выведении. Этот феномен поддерживает мнение, что концентрированное распределение внутривенной эмульсии препарата в некоторые органы происходит в результате фагоцитоза и удерживания масляных капель фагоцитами в ретикулоэндотелиальной системе. Это так же поддерживает клиническое наблюдение, что препарат оказывает значительное терапевтическое действие на рак легких, печени и почек. Содержание препарата в желудке было ниже, чем в близлежащих органах. Но период его персистенции был длительным, и если препарат вводили в больших количествах много раз в течение длительного времени, он накапливался и в желудке. Следовательно, этот препарат обладает терапевтическим эффектом и при раке желудка. Концентрация препарата в мозге была относительно постоянной, и это показывает, что он может проходить через гематоэнцефалический барьер и оказывать терапевтическое действие. Относится ли этот феномен к болеутоляющему действию, покажут дальнейшие эксперименты. Концентрация препарата в почках была самой высокой через 05,ч после введения, а затем резко снизилась. Начальная концентрация препарата в кишечнике была низкой, но с течением времени она увеличилась. Это могло быть в результате кишечно-печеночной циркуляции.

4.5. Выделение

          Наблюдали присутствие меченого препарата в моче и фекалиях. Процентное отношение выведенного количества внутривенной дозы соответствовало 38 % через 24 ч после применения препарата. Это показало, что внутривенный препарат медленно выводится. Возможные причины, по которым он выводился с желчью, или другими путями, или накапливался в содержимом желудка и кишечника, будут найдены в дальнейших экспериментах.

4.6. Степень связывания с белками плазмы

           Связывание препарата с белками плазмы обратимо. Оно зависит не только от фармакокинетики, но также от интенсивности действия и периода персистенции препарата. Более того, оно часто тесно связано с механизмом действия, эффектами взаимодействия и т.д. препарата. В этом эксперименте через 4 ч после введения препарата степень связывания с белками плазмы 3Н-масла семян коикс составила 80 %. Препарат также имел высокое сродство к другим тканям. В общем, степень связывания с белками плазмы 3Н-масла семян коикс была выше, чем у других препаратов. Таким образом, и период его активности, и период полувыведения были высокими.

4.7. Связь теории трофических каналов с заключением этого эксперимента

            Традиционная китайская медицина считает, что семена коикс сладкие и холодные по природе, и распределяются по каналам селезенки, желудка и легких. Хотя органы, описанные в теории внутренних органов и каналов традиционной китайской медицины, не полностью идентичны западной медицине, однако основные функции их идентичны или похожи. Более того, традиционные эффекты семян коикс сходны с теми, которыми владеет современная фармакология. Традиционная китайская медицина считает, что трофические каналы ориентирует распределение препарата в определенные части тела, т.е. препарат попадает в ту часть тела, где может оказать действие. Характеристики выборочного распределения эффективных компонентов китайской травы in vivo имеют материальную основу для теории трофических каналов и могут дать ключ к разгадке, разъясняющий сущность этой теории. Исследователи показали, что 61 % органов, в которых препарат должен распределяться согласно теории трофических каналов, полностью идентичны органам, которые накапливают наибольшие количества эффективных компонентов. Следовательно, характеристики выборочного распределения эффективных компонентов китайской травы in vivo – важны также для доказательства теории трофических каналов.
         Результат этого эксперимента показывает, что основные действующие компоненты семян коикс распределяются в селезенке, печени и легких, что лишь слегка отличается от путей распределения, которые должны быть согласно теории трофических каналов.
         Тем не менее, эксперимент обеспечивает современную научную основу для традиционной теории трофических каналов.
         Клиническая практика и фармацевтические исследования показали, что препараты, изготовленные из одинаковых химических веществ, часто вызывают разные биологические эффекты. Следовательно, важно изучить биодоступность и фармакокинетику для разработки препаратов, а также для оптимизации производственного процесса и клинических курсов и методов введения, базирующихся на высокотехнологичных стадиях развития новых препаратов.
          Составляющие китайской растительной медицины очень сложны. С точки зрения фармакодинамики большинство исследователей уделяло внимание изучению эффективных компонентов. Из-за того, что китайская растительная медицина традиционно пользуется опытом и имеет мало количественных наблюдений за всасыванием, метаболизмом и т.д. in vivo, фармакокинетические исследования китайской растительной медицины внесли ее в списки как новое направление. Метод 3Н-мечения обеспечивает простой и чувствительный способ исследования всасывания, распределения, выведения и метаболизма эффективных компонентов китайской растительной медицины. В этом эксперименте сделано несколько важных для китайской народной медицины исследований в области в фармакокинетики, что послужило обеспечению нового развивающегося направления в исторической традиционной китайской растительной медицине, и что в дальнейшем поможет создать лекарственную форму масла семян коикс более удобную в клиническом применении и обладающую прекрасными свойствами.

Список литературы

1. Wang Zhencheng: (translator): Drug Processing and Pharmacokinetics. People's Public Health Publishing House 1981: 169-177.
2. Zhu Xiuyuan: Several Basic Concepts about Pharmacokinetics. Development of Physiological Science 1979;10(1): 29.
3. Pharmacokinetics. Science Publishing House 1981: 50-87.
4. Yang Youchun: A Non-Linear Algorithm and Procedure for Calculating Pharmacokinetic Parameters. Pharmacology Journal of China 1983; (4): 217.
5. Ji Xiujuan et al: Metabolism of Ester Alkali>
6. Pan Nanren et al: Absorption, Distribution and Excretion of H3-octanoyl-primaquine in Rat. Pharmacology Journal of China 1982;3(1): 62.
7. Xu Shun et al: Experimental Methodology of Pharmacology, Edition 2. Public Health Publishing House 1991.
8. Songu-rize E, et al. Metabolism and Cardiac Action. J Pharmacol Exp. Ther 1983:226: 65.
9. Comer R et al: Basic Concept of Pharmacokinetics.1979: 162-307.
10. Odani T, Tanizawa H. Takino Y. Studies on the Absorption, Distribution, Excretion and Metabolism. Hem Farm Bull 1983;31:292.
11. Huang MT, et al: Harringtonine, an Inhibitor of Initiation of Protein Biosynthesis. Moll Phormacol 1975; 11: 511.
12.L. K. Paazow et al: Journal of Phamacokinetics and Biophasmacentics 1979;7(5):481.
13. Pirson P, et al: Primaquine Lipsome in Chemotherapy of Experimental Murine Malaria. Am Trop Med Parasol 1980;74(4): 383
14. Strother A, et al: Development of New Derivative of Primaquine by Association with Lysosomotropio Carriers. Bull WHO 1981; 59 (3): 449.
15. Francis ST, et al: Procedure for Preparation of Liposomes with Large Internal Aqueous Space and High Capture by  Reverse-Phase Evaporation.
16. Jaliano RL: The Effect of Particle Size and Charge on the Clearance Rates of Liposomes. Biochem Blophy Res Commun 1975; 63:651.
17. Liu Changxiao: Pharmacokinetics. Hunan Publishing House of Science and Technology 1980:143.
Biological Pharmacy. Jiangsu Publishing House of Science and Technology 1980
18. Chingell CF: Drug Fate and Metabolism 1977;1:188.
19. Tillement JP, et al: Advances in Drug Research 1984;13: 60.
20. Machichan JJ: Clin  Pharmacokinet 1984;9(suppl.1): 32.
21. Almeida IT et al: Biochem Pharmacol 1985;34: 2431.
22. Rowland M and Tozer TN: Clinical Pharmacokinetics, Concepts and Application Lea and Febiger,Phladephia,1980:116-119.
23. Research on Tritium-Labeling of Tanshinoe?A Sodium Subfonate and Its Distribution and Excretion in Rat. Jiangsu Medicine 1978; 4(9): 1-2
24. Cai Xilin: Absorption, Distribution and Excretion of 3H-fleabane in Vivo. Chinese Herb Medicine 1981; 2(2): 26.
25. Zheng Zhenyuan: Research on Pharmacokinetics of 3H-green-chiretta-lactone. Chinese Herb Medicine 1982;13(9): 33-36.
16. Mo Qizhong, Gong Fu: Absorption and Distribution, Excretion of 3H-muctone in Vivo. Chinese Herb Medicine Study 1984; (7): 1-4.
27. Wang Xuefu: Metabolism Process of 3H-ring-buxine-D in Rat. Pharmacy Bulletin 1982;17(4): 6-10.
28. Li xi, Gao Ge: Research on Effective Anticancer Components of Brucea Javanica. Chinese Herb Medicine Bulletin 1979;10 (11):14-17.
29. Zhang Guoming: Pharmacokinetics of Amygdalin in Rabbit. Pharmacology Journal of China 1986;7(5): 460-462.
30. Huo Yushu: Pharmacokinetics and Intracorporal Distribution of  3H-ginsenoside Monomer RE1. Pharmacology Journal of China 1986; 7(6): 519-521.
31. Lou Yaqin: Pharmacokinetics and Intracorporal Fate of Ligustrazine  Phosphate in Dog and Rat. Journal of Pharmacy 1986;21 (7): 481-487.
32. Huang Jian, Lu Guanwei: Solving of Pharmacokinetic Equation of Two Compartment Model of Intravenous Injection with Portable Computer. Research of Chinese Herb Medicine 1985; (9): 41-43.
33. Li Min: Research on Pharmacokinetics of  3H-Schizandrin-ether. Pharmacy Bulletin 1984;19(9): 55.
34. Lu Guangwei: Absorption, Distribution, Excretion and Metabolism of 3H-gastrodine in Rat. Journal of Pharmacy 1985;20 (3):167-172.
35. Sun Yang: Metabolism and Transformation of Rheum and Rheum-ether in Rat and Mouse. Journal of Pharmacy College of Nanjing 1985: 16(1): 72.
36. Research on Bioavailabilty and Pharmacokinetics at Different Dosage. Pharmacy Bulletin 1985;20(4): 243.
37. Measurement of Pharmacokinetic Parameters with Pharmacological Methods-Expounding Pharmacokinetic Research on Chinese Herb Medicine.   Chinese Herb Medicine 1985;16(4):161-164.
38. Wang Shimin: Elementary Introduction on Tropism Theory of Chinese Herb Medicine. Sanxi. Traditional Chinese Medicine.1985;1(1): 42-43.
39. Ding Rongshi: Elementary Introduction on Theories of Tropism and Receptor of Traditional Chinese Medicine. Guangdong Medicine 1986; 7(6): 28-30.